Les anticorps primaires anti-cheval conjugués à la PerCP sont des immunoréactifs fluorescents émettant dans le rouge, conçus pour la cytométrie en flux multiparamétrique avec une excitation par laser à 488 nm. Produits par immunisation d'animaux hôtes tels que la chèvre, le lapin ou la souris avec des immunoglobulines de cheval purifiées, ces anticorps sont purifiés par chromatographie d'immunoaffinité puis conjugués au complexe protéique péridinine-chlorophylle (PerCP), un complexe pigment-protéine photosynthétique d'environ 35 kDa isolé à partir de dinoflagellés, principalement du genre Glenodinium. La PerCP présente des propriétés spectrales particulières, avec un maximum d'excitation à 488 nm et un maximum d'émission à environ 675 nm, correspondant à un grand déplacement de Stokes d'environ 187 nm. Le complexe est constitué de molécules de péridinine, un caroténoïde, et de chlorophylle a associées de manière non covalente à des sous-unités protéiques, permettant un transfert d'énergie efficace de la péridinine vers la chlorophylle a. Avec un coefficient d'extinction molaire d'environ 2,3 × 10⁵ M⁻¹cm⁻¹ et un rendement quantique de 0,85, la PerCP présente une forte luminosité, pouvant être environ 2 à 4 fois supérieure à celle de la PE et 5 à 10 fois supérieure à celle du FITC dans des conditions optimales. Son émission dans le rouge lointain à 675 nm limite le chevauchement spectral avec le FITC (525 nm), la PE (578 nm) et le PE/Atto 594 (617 nm), faisant de la PerCP un fluorophore particulièrement adapté aux panels multiparamétriques. Les spécificités disponibles comprennent les anticorps anti-IgG (H+L), anti-IgG (Fc), anti-IgG1, anti-IgG2 et anti-IgM. Les produits sont généralement soumis à une adsorption croisée contre les immunoglobulines de souris, de rat, de lapin et de bovin afin d'assurer une spécificité élevée dans les échantillons provenant de plusieurs espèces.

Applications

Les conjugués PerCP sont largement utilisés en cytométrie en flux et en tri cellulaire activé par fluorescence (FACS) pour l'immunophénotypage des cellules mononucléées du sang périphérique équin (PBMC), notamment pour la détection de marqueurs de surface tels que CD4, CD8, CD14, CD21 et les molécules du CMH de classe II (ELA). L'émission dans le rouge lointain (675 nm), associée à un chevauchement spectral limité, facilite la détection simultanée avec le FITC (vert), la PE (orange) et l'APC (rouge lointain) dans des panels à 4 à 6 couleurs, ce qui rend la PerCP particulièrement intéressante pour les études d'immunologie multiparamétrique. Toutefois, la PerCP présente une photosensibilité modérée et peut subir des modifications spectrales lors d'une exposition à certains fixateurs tels que le paraformaldéhyde ; les fixations prolongées (> 24 heures) doivent donc être évitées. Ces conjugués peuvent également être utilisés en microscopie d'immunofluorescence, où leur émission dans le rouge lointain permet d'obtenir un bon contraste avec l'autofluorescence de fond. Les autres applications comprennent le criblage à haut contenu, les essais de prolifération cellulaire et les immunodosages multiplex sur billes.

Les dilutions de travail typiques pour la cytométrie en flux sont comprises entre 1:20 et 1:200. Ces réactifs doivent être conservés à 4 °C, à l'abri de la lumière, et ne doivent pas être congelés. Ils sont exclusivement destinés à un usage en recherche et ne sont pas destinés aux procédures diagnostiques.