Les anticorps primaires anti-cheval non conjugués sont des immunoglobulines purifiées qui reconnaissent et se lient spécifiquement aux antigènes équins sans être liés de manière covalente à des enzymes, des fluorophores ou à d’autres molécules détectables. Produits par immunisation d’espèces hôtes telles que la chèvre, le lapin, la souris ou le mouton avec des immunoglobulines de cheval purifiées, généralement des IgG, ou avec des protéines équines spécifiques, ces anticorps sont isolés à partir de l’antisérum par chromatographie d’affinité sur immunoadsorbant à l’aide d’immunoglobulines de cheval immobilisées, permettant d’obtenir des fractions d’anticorps hautement purifiées. Les formats non conjugués offrent une flexibilité maximale, car ils peuvent être associés à n’importe quel anticorps secondaire marqué ou système de détection adapté aux exigences expérimentales spécifiques.
Les anticorps spécifiques d’isotypes sont particulièrement utiles pour la caractérisation des sous-classes et la distinction des différentes réponses anticorps en immunologie équine. Les formulations sont généralement disponibles sous forme liquide ou lyophilisée dans une solution saline tamponnée au phosphate (PBS), avec des protéines stabilisantes telles que l’albumine sérique bovine (BSA) ou la gélatine. De nombreux produits font l’objet d’une adsorption croisée étendue contre des protéines sériques d’origine bovine, ovine, caprine, de lapin, murine et humaine afin de réduire les réactions croisées et d’assurer une haute spécificité dans les échantillons biologiques complexes. Les concentrations protéiques sont généralement comprises entre 0,5 et 10 mg/mL, selon le fabricant et la méthode de purification. Les anticorps non conjugués présentent une bonne stabilité et peuvent être conservés pendant des périodes prolongées à 2–8 °C pour une utilisation à court terme ou à −20 °C pour une conservation à long terme, avec des cryoprotecteurs appropriés.
Applications
Les anticorps anti-cheval non conjugués sont utilisés comme réactifs primaires de détection dans un large éventail de formats d’immunoessais. En Western blot, ils se lient aux protéines équines d’intérêt après séparation par SDS-PAGE et transfert sur membrane, permettant une détection ultérieure à l’aide d’anticorps secondaires conjugués à des enzymes et de substrats chimiluminescents ou chromogènes.
En ELISA, ces anticorps peuvent être utilisés comme anticorps de capture ou de détection pour la quantification des immunoglobulines équines, des cytokines, des protéines de phase aiguë et des marqueurs de maladies infectieuses, notamment ceux associés au virus de la grippe équine, à l’herpèsvirus équin et à Rhodococcus equi, avec des dilutions de travail généralement comprises entre 1:1 000 et 1:100 000.
En immunohistochimie et immunocytochimie, les anticorps non conjugués permettent la localisation des antigènes dans des tissus fixés au formol et inclus en paraffine, des coupes congelées et des cellules équines en culture, avec des dilutions optimales généralement comprises entre 1:100 et 1:5 000 selon l’abondance de l’antigène et les conditions de préparation des tissus.
En immunoprécipitation et immunoprécipitation de la chromatine (ChIP), ces anticorps permettent l’enrichissement et la purification de protéines équines et de complexes protéiques en vue d’analyses protéomiques et génomiques ultérieures. D’autres applications comprennent les essais de neutralisation et de blocage, dans lesquels les anticorps non conjugués inhibent directement la fonction de l’antigène ; la cytométrie en flux, nécessitant une détection ultérieure à l’aide d’un anticorps secondaire fluorescent ; la microscopie en immunofluorescence ; ainsi que le développement d’ELISA en sandwich.
Les dilutions des anticorps doivent être optimisées expérimentalement en fonction du type d’échantillon, de l’abondance de l’antigène et du système de détection utilisé. Ces réactifs sont exclusivement destinés à la recherche et ne sont pas destinés aux procédures diagnostiques.